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LacZ est un gène bactérien qui produit la bêta -galactosidase , enzyme qui décompose le lactose en glucose et galactose . L'enzyme clive également le composé X-gal , qui produit une couleur bleue qui biologie moléculaire utilisent en tant que marqueur ou rapporteur pour suivre la présence du gène LacZ dans les cellules . Transfection
scientifiques lient le gène LacZ avec un gène d'intérêt , tels que l'insuline , avec un fragment d'ADN appelé plasmide . Ils utilisent des méthodes de transfection chimiques ou électriques pour obtenir le plasmide dans les cellules. Les cellules sont testées pour l'expression de LacZ de la bêta -galactosidase , qui marquera également la présence du gène de l'insuline .
Fixation
Après transfection, les cellules sont cultivées sur une boîte de Pétri en plastique. Pour le dosage , le milieu de culture est éliminé et les cellules sont lavées avec du tampon phosphate salin (PBS ) . Une solution de fixation fraîche de formaldéhyde , de méthanol et le glutaraldéhyde est utilisé pour fixer les cellules pendant deux minutes. Le fixateur est retiré et les cellules sont lavées à nouveau avec PBS.
X -gal
Une solution de coloration douce qui contient X -gal , potassium ferri - du cyanure de potassium et de ferro- cyanure est ajoutée à des cellules pendant une nuit. Les cellules sont à nouveau lavées avec du PBS, et si le gène LacZ est présent, la bêta- galactosidase auront coupé le X -gal et les cellules seront bleues .
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