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Les biologistes moléculaires placer systématiquement des fragments d'ADN - plasmides - contenant des gènes d'intérêt dans des bactéries . C'est un moyen simple de se répliquer et produire plus du gène et /ou générer le produit de ce gène, qui pourrait être quelque chose comme l'insuline . Électroporation
électroporation est une méthode pour obtenir le plasmide dans les bactéries. Les bactéries et les ADN sont mélangés dans un tube et sont exposés à un champ électrique produit par un appareil d'électroporation . Le champ électrique perce de petits trous dans les bactéries , ce qui permet l' ADN dans les cellules. Les bactéries qui prennent l'ADN plus efficacement sont des cellules électrocompétentes .
Méthode
bactéries électrocompétentes telles que E. coli peut être produit par une série de centrifugations répétées, d'abord retirer leur milieu de croissance et le remplacer par de l'eau ultra -pure , et enfin à remplacer l'eau par du glycérol. Dans les dernières étapes les bactéries sont remises en suspension dans un petit volume de glycérol , divisé en tubes , congelés dans l'azote liquide et stockées à long terme à un degré Celsius -80 ( -112 degrés Fahrenheit ) congélateur.
Photos Considérations
Ce protocole est généralement fait avec de grands volumes qui nécessitent de grandes fioles , des agitateurs et des centrifugeuses . Il est essentiel que les étapes de la récolte au stockage toutes être réalisées à des températures glaciales . Eau ultra-pure doit être utilisée.
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